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如何选择紫外分光光度计的参比溶液

时间 : 2022-09-27 点击量 : 3617
  紫外分光光度计是一种将成分复杂的光,分解成光谱线的科学仪器,利用能产生多种波长的光源,通过一系列的分光装置,从而产生特定波长的光,光通过被测样品时,部分光被吸收,并计算出样品的吸光度值,转化为样品的浓度。它已经成为现代分子生物学实验室的常规仪器。它常用于核酸、蛋白质和细菌生长浓度的定量。

 紫外分光光度计

  由于参比溶液吸收一定量的光,通常需要在比色法测量前扣除这种吸收,以便更接近被测组分的吸收值,这样就可以从校准曲线上计算出被测组分的浓度。紫外分光光度计在进行光度测量时,利用参比溶液来调整仪器的零点,可以消除由于吸收池壁和溶剂对入射光的反射和吸收而产生的误差,并扣除干扰的影响。参考溶液的选择可以根据以下条件进行。

 

  紫外分光光度计参比溶液的选择

 

  1、溶剂

 

  试样成分简单,共存的成分对测定的光的波长没有吸收。

 

  2、试剂

 

  色素或其他试剂对测定波长的吸收,按相同条件进行显色反应,不需要加入试样的试剂。

 

  3、试液

 

  样品基质溶液在测定波长处有吸收,显色剂本身无色,可按与显色反应相同的条件处理样品,只是不加显色剂。

 

  4、平行操作参考

 

  用不含被测组分的试样,在与被测样品相同的条件下同时进行,得到平行操作参比溶液。

 

  例如,在监测某种药物浓度时,将正常人的血样和待测血液浓度的血样平行处理,前者得到的溶液可作为平行操作参比溶液。

 

  注意事项

 

  1、试剂和显色剂无色时,可采用蒸馏水作为参比溶液。

 

  2、显色剂有颜色时,可以选择不加样品的试剂空白溶液作为参比溶液。

 

  3、显色剂是无色的,而试液中存在其他有色离子时,可用不含显色剂的试液作为参比溶液。

 

  4、显色剂与供试品溶液都有颜色时,可在供试品溶液中加入适当的掩蔽剂,将被测组分掩蔽起来,使之不再带有显色剂,而显色剂和其他试剂则按供试品溶液的测定方法加入,作为参考溶液,这样可消除显色剂与某些共存组分的干扰。

 

  5、改变试剂的加入顺序,使被测组分不发生颜色反应,此溶液可作为消除干扰的参考溶液。


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