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用紫外分光光度计测量吸光度时读数会不断变化?

时间 : 2022-08-11 点击量 : 1270

  为什么当我们使用紫外分光光度计测量吸光度时读数会不断变化?是因为显色反应还没有完成还是其他原因?其实不然,仪器的灵敏度越高,吸光度值的漂移就越大。紫外分光光度计的设计原理和工作原理允许吸光度值在一定范围内变化,仪器具有一定的准确度和精密度。

 紫外分光光度计

  1、样品的稀释浓度

 

  样品稀释浓度也是一个不可忽视的因素,因为样品中不可避免地存在一些细小颗粒,尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在会干扰测试结果。为了尽量减少颗粒对检测结果的影响,要求核酸的吸光度值至少大于0.1A,最好在0.1-1.5A范围内。在这个范围内,粒子的干扰比较小,结果比较稳定。因此,这意味着样品的浓度不能太低或太高(超出光度计的测试范围)。

 

  2、核酸本身的理化性质

 

  溶解核酸的缓冲液的pH值和离子浓度也会在测试过程中离子浓度过高导致读数漂移,因此建议使用具有一定pH值和低离子浓度的缓冲液(如TE)可以大大稳定读数。核酸的吸光度值受pH值和缓冲离子浓度的影响。只有在一定的pH和低离子浓度(如10mMTris-HClpH8.0)下才能得到准确的检测结果。水的pH值不稳定,可能导致检测错误。一些缓冲液在紫外范围内有自己的吸收。为确保准确测量,请使用与悬浮或洗脱样品时相同的缓冲液。

 

  3紫外分光光度计操作因素

 

  1)使用仪器前,用户应先了解仪器的结构和工作原理,以及各操作旋钮的作用。

 

  2)仪器应放置在干燥的室内,使用时放置在坚固稳定的工作台上,室内照明不宜过强。天气炎热时,请勿使用风扇直接对仪器吹气,以免灯泡灯丝点亮不稳定。

 

  3)按下电源前应检查仪器的安全性能,电源接线要牢固,电源也要好,各调节旋钮的起始位置要正确,然后按下电源开关.仪表未接通电源时,仪表指针必须在“0”线上,此时可用仪表上的校准螺丝调整。

 

  4)如果大幅度改变测试波长,需要稍等片刻,等灯管热平衡后,重新校准“0”和“100”点,再重新测量。

 

  5)比色杯使用后,立即用蒸馏水冲洗干净,并用干净的软纱布擦去水渍,以免损坏表面光洁度,影响比色杯的透光率。


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